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免疫組化問題解答

2023-04-03 一.染色過強原因解決方法1.抗體濃度過高或孵育時間過長降低抗體滴度、抗體孵育時間：室溫1小時或4度過夜2.孵育溫度過高超過37度一般在室溫20-28度cDAB顯色時間過長或濃度過高顯色時間不超過5-12分鐘，以顯微鏡下觀察為準。二.非特異性背景染色原因解決方法1.操作過程中沖洗不充分每步沖洗3次每次5分鐘2.組織中含過氧化物酶未阻斷可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時間延長3.組織中含內原性生物素正常非免疫動物血清再封閉4.血清蛋白封閉不充分延長血清蛋白封閉時間。三.染色弱原因...

細胞株和菌株【豬靜脈血管內皮細胞】注意事項

2023-03-29 細胞株和菌株【豬靜脈血管內皮細胞】注意事項：1.實驗進行前，無菌室及無菌操作臺(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風扇運轉10分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，且即使培養基相同亦不共享培養基，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。操作間隔應讓無菌操作臺運轉10分鐘以上后，再進行下一個細胞株之操作。2.無菌操作工作區域應保...

熒光PCR檢測試劑盒常常需要精細操作

2023-03-15 熒光PCR檢測試劑盒是一種常用的分子生物學實驗工具，被廣泛應用于醫學、生物學、環境科學、農業等領域。其作用是在PCR（聚合酶鏈式反應）過程中通過熒光信號檢測DNA序列特定變化，檢驗目標DNA是否存在、是否出現特定變異或突變等。工作原理：PCR是一種在體外以無細胞為基礎的DNA復制技術，包括DNA的兩個變性、引物、擴增和DNA的再生。PCR檢測試劑盒的工作原理基本上是利用PCR技術，通過引入熒光標記物或探針來檢測PCR產物，轉化DNA目標序列的檢測結果為熒光信號。熒光PCR檢測...

實驗室常用的保菌方法

2023-03-11 菌種保藏是指保持微生物菌株的活力和遺傳性狀的技術。微生物在使用和傳代過程中容易發生污染、變異甚至死亡，因而常常造成菌種的衰退。菌種保藏的目的就是使菌株存活、不丟失、不污染雜菌、不發生或少發生變異，保持菌種原有的活性和各種特征。菌種保藏的基本原理是使微生物的生命活動處于半永jiu性的休眠狀態，也就是將微生物的新陳代謝作用限制在最di范圍內。實驗室常用的保菌方法有：甘油保菌法、斜面保菌法、穿刺保菌法、液體石蠟覆蓋保藏法、沙土保藏法、冷凍干燥法。微基生物在以上幾種菌種保藏方法的基礎...

PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成

2023-03-02 人乳清蛋白(hLALBA)轉基因熒光PCR試劑盒適用于檢測氣管分泌物拭子、肺組織等樣本中的人乳清蛋白(hLALBA)轉基因，用于人乳清蛋白(hLALBA)轉基因感染的輔助診斷，其檢測結果僅供參考。PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：①模板DNA的變性：模板DNA經加熱至94℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應做準備；②模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至...

細胞復蘇、傳代與凍存操作流程

2023-03-02 細胞復蘇、傳代與凍存操作流程儀器與試劑儀器試劑耗材離心機胎牛血清（FBS）離心管（15ml、50ml）生物安全柜無菌1×PBSpH=7.2T-25細胞培養瓶電動移液器0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA一次性無菌移液管（2ml、5ml、10ml）CO2培養箱wan全培養基（含血清）1.8mL凍存管倒置顯微鏡液氮罐凍存液：90%FBS+10%DMSO異丙醇程序降溫盒恒溫水浴鍋超低溫冰箱護目鏡、厚毛線手套等操作流程復蘇1）將恒溫水浴鍋中的水預熱到37℃；2）準備一支15ml離心...

菌種培養過程中需要注意哪些

2023-02-08 菌種保存條件：斜面、穿刺菌和凍干粉應在4-10度保存，甘油菌在-80度保存。菌種培養條件：模式菌株：是培養溫度：37℃培養時間：24-48h需氧類型：5%二氧化碳生物安全級別：二級菌種培養注意事項：1、微生物菌種應保存于低溫、清潔和干燥的地方，室溫放置時間過長會導致菌種衰退；2、菌種操作在無菌條件下進行，接種完畢應該滅菌再做丟棄處理；3、斜面菌種和穿刺菌種保存時間通常為3-6個月，應根據菌種狀況及時結轉；凍干粉保存時間通常是2-25年；甘油菌保存時間為2-5年；4、凍干首-次...

何為PCR技術？

2023-01-06 PCR技術，即聚合酶鏈反應（polymerasechainreaction，PCR）是由美國PECetus公司的KaryMullis在1983年（1993年獲諾貝爾化學獎）建立的。這項技術可在試管內的經數小時反應就將特定的DNA片段擴增數百萬倍，這種迅速獲取大量單一核酸片段的技術在分子生物學研究中具有舉足輕重的意義，推動了生命科學的研究進展。它不僅是DNA分析常用的技術，而且在DNA重組與表達、基因結構分析和功能檢測中具有重要的應用價值。PCR可以被認為是與發生在細胞內的DN...